Toma de muestras

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR  ESTUDIO HEMATOLOGIA

La hematología es una especialidad médica que tiene una gran dependencia de los métodos de laboratorio en general y de las técnicas citológicas en particular, recordemos que esta última resuelve la problemática diagnóstica en un 80% de las hemopatías.

Para realizar un correcto análisis hematológico, la sangre tiene que seguir conservando sus características físicoquímicas para que no  existan alteraciones o artefactos en la muestra extraída y que pudieran dar lugar a resultados erróneos.

Las muestras de sangre deben recogerse en animales que han estado en ayunas. El período de ayuno debe ser al menos de 8 horas y preferiblemente de 12 horas.

La primera premisa a respetar para realizar un  análisis hemocitológico es que la sangre obtenida y transferida a  un tubo con anticoagulante no tenga coágulo.

La segunda premisa es conservar siempre la proporción entre sangre y anticoagulante.

EL EDTA

Es el anticoagulante de elección para hematología, se utiliza a una concentración 1 mg por 1 .c. de sangre o 0.5 mls de solución al 1 % para 5 mls de sangre, o  0.1 mls de solución al 1% para 1 mls de sangre.

Una excesiva prolongación con el anticoagulante hace que se altere las células sanguíneas. Se recomienda realizar un frotis sanguíneo si el envío se prolonga más de 24 horas.

También es el anticoagulante de elección para Test de  Coombs y para realizar tinciones citoquímicas.

LA HEPARINA

No es el anticoagulante de elección en hematología.

Se utiliza a una concentración de 0.2 c.c. de heparina saturada por cada 1 c.c. de sangre.

Las alteraciones que se producen son: degeneración nuclear de los neutrófilos, deg

No es APTA par estudios de inmunohematología: Test de Coombs.

No se utiliza para las tinciones citoquímicas.

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR  ESTUDIO DE HEMOSTASIA O PRUEBAS DE COAGULACIÓN

El citrato sódico al 3.8% es el anticoagulante de elección  para los estudios de coagulación. Se utiliza a una concentración de un parte de citrato sódico 0.11 M por nueve partes de sangre total. Es totalmente necesario e imprescindible mantener la relación anticoagulante/ sangre para realizar las pruebas de coagulación, los valores obtenidos sin esta relación no tienen ningún valor diagnóstico. Ejemplo: para conseguir un volumen total de muestra de 3 cc se deben poner en la jeringa 0,3 cc de citrato y extraer 2,7 cc de sangre (0,3 x 9).

Una vez obtenida la muestra, se mezcla y se deja a temperatura ambiente durante 5-7 minutos.

Se centrifuga la muestra a 2500-3500 rpm durante 15 minutos y se separa el plasma por pipeteado a otro tubo de plástico dentro de los 30 primeros minutos post-extracción.

Refrigerar en caso de envío rápido.

Congelar a –28 º C en caso de envío retardado (> de 4 horas hasta 15 días como máximo) La congelación o descongelación pueden producir la crioprecipitación de algunos factores de coagulación.

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR  ESTUDIO DE BIOQUÍMICA Y ELECTROFORESIS.

Se puede emplear plasma y/o  suero para la bioquímica y suero para la electroforesis.

SEPARACION DEL PLASMA

El tubo que contiene sangre más anticoagulante se debe centrifugar a 1.500-2.000 r.p.m. durante 10-15 minutos.

El plasma que es la capa más externa se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un cuentagotas y se transfiere a un tubo de almacenamiento estéril y conservarlo en refrigeración o congelación.

SEPARACION DEL SUERO

Se deja que la sangre -transferida a un tubo sin anticoagulante- coagule completamente en el tubo.

Cuanto más tiempo se deje el tubo a temperatura ambiente, alrededor de dos horas, mayor cantidad de suero se obtendrá y más pruebas diagnósticas se podrán realizar.

A temperatura ambiente entre 20-25 C la sangre transferida al tubo se debe dejar un mínimo de media hora  y preferiblemente de 1-2 horas, la coagulación y la retracción se pueden producir mucho más rápidamente si se incuba el tubo a 37º C. durante 30 minutos y en ambos casos el tubo con la sangre se pone después en refrigeración durante 30-60 minutos.

Una vez obtenida la retracción del coágulo se centrifuga igual que si de plasma se tratase.

Normalmente por cada 1 cc de sangre entera se pueden obtener 0.3 cc de suero.

La separación del coágulo es perfecta si se emplean tubos de vidrio o de poliestireno tratados, los tubos de plástico o de poliestireno sin tratar no son aconsejables porque la retracción del coágulo es menor, el coágulo se adhiere a las paredes, e incluso se puede alojar en la parte superior del tubo, haciendo que la separación del coágulo sea más difícil y a la hora de intentar separar el coágulo se produzca hemólisis, que es el enemigo de la mayoría de las pruebas bioquímicas, hormonales y de electroforesis.

Lo que nunca se debe hacer es centrifugar la sangre antes de que se complete la coagulación, en estas situaciones se formarán cadenas de fibrina que retendrán en su arquitectura, enzimas (ALT, AST, lipasa...),  substratos (calcio,  fósforo, colesterol...), iones (sodio, potasio, cloro...), proteínas (anticuerpos, globulinas...), hormonas y metabolitos y, los resultados obtenidos de estos sueros siempre serán menores -y por consiguiente inexactos- a los obtenidos de sueros normalmente procesados. También es importante resaltar que no se deben poner los tubos con sangre sin anticoagulantes inmediatamente a la temperatura de 4º C ya que tampoco se obtendrá la retracción del coágulo.

Si la extracción de sangre se realiza a última hora de la tarde, es preferible dejarla en reposo a 20-25º C. durante toda la noche y a la mañana siguiente ponerla en refrigeración a 4º C durante 30 minutos y separar el suero.

Si la muestra ha de ser enviada al Laboratorio ésta debería estar separada del coágulo ya que los golpes sufridos por las células en el coágulo, durante el viaje, puede originar su rotura y que se produzca hemólisis, que afectará negativamente a la mayoría de las pruebas.

En resumen para la correcta realización y envío de muestras para realizar pruebas bioquímicas y electroforesis  se debe emplear suero o plasma separado en tubos de poliestireno estériles y refrigerados a 4ºC y si está congelado mucho mejor.

En la siguiente tabla se expone la interferencia de los diferentes anticoagulantes utilizados, influencia de factores externos y estabilidad de las pruebas comúnmente utilizadas en Medicina Veterinaria.

HORMONAS

Excepto algunas hormonas que requieren unas condiciones de manejo especiales, se deben seguir exactamente los pasos explicados en el apartado separación del suero.

Se aconseja  siempre suero y en segundo lugar plasma de con heparina.

Para la determinación de hormonas tiroideas no se debe utilizar sangre+edta..

Para la determinación de ACTH se debe emplear sangre+edta.